高效液相色谱法测定食用植物油中抗氧化剂的含量

抗氧化剂的含量汪强I,殷宪超阮艺静I,姜泽慧X司雄元\"，俞明正2宀（1.马鞍山市食品药品检验中心，马鞍山243000; 2.江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所，南京210014；3.江苏省食品质量安全重点实验室，南京210014； 4.安徽农业大学生物技术中心，合肥230036）中图分类号：0657.7

文献标志码：B文章编号：1001-4020（2019）10-1215-04近年来，百姓生活水平不断提高，食用植物油的 使用量逐年增加皿。食用植物油在日常环境条件下 由于氧化会发生变质。为了阻止或延缓食用植物油

操作繁琐，溶剂消耗大，且不适合处理大批量样品等 缺点。本工作采用液-液萃取法与高效液相色谱法

相结合测定食用植物油中TBHQ.BHA和BHT的 含量。的氧化，食品生产企业会人为添加抗氧化剂，延长食 用植物油的保质期。目前，使用最为广泛的人工合

成抗氧化剂为特丁基对苯二酚（TBHQ）、叔丁基轻 基茴香醯（BHA）和2, 6-二叔丁基-4-甲基苯酚

1试验部分1.1仪器与试剂岛津LC-20AT型高效液相色谱仪，配紫外检 测器；12位N-EVAP 5085型氮吹仪；Arium-pro型

（BHT）,这3种抗氧化剂都具有一定的毒性，过量 食用会对人体健康造成损害3〕，我国在国家标准

GB 2760 —2014灼中规定 TBHQ.BHA 和 BHT 在 食用植物油中的最大使用量均不能超过0.2 g •

纯水系统;0.22 “m有机微孔滤膜。TBHQ.BHA和BHT的单标准储备溶液：

1.000 g • L7 ,分别称取 TBHQ、BHA、BHT 标准 品100 mg,用乙月青溶解并转移至100 mL棕色容量 瓶中，用乙月青定容，于0〜4 °C下避光保存。kg-\\因此，准确测定食用植物油中TBHQ、BHA

和BHT的含量，对保障百姓餐桌安全具有十分重 要的意义。《国家食品安全监督抽检实施细则》指定GB 混合工作溶液系列：分别移取TBHQ、BHA、

5009.32 一 2016⑷作为测定食用植物油中TBHQ. BHA和BHT的唯一方法。在实际分析过程中发 现，阳性样品中的有关物质在该方法中未被检出，因

此该方法存在不足，需要对其进行改进。现有测定

BHT的单标准储备溶液适量，用乙月青-N,N-二甲基

甲酰胺（10 + 1）溶液稀释成1,5,10,50,100 mg •

LT的混合工作溶液系列。TBHQ.BHA和BHT标准品（纯度均大于

食用植物油中TBHQ、BHA和BHT含量的样品前

99%）；甲醇和乙睛均为色谱纯；N,N-二甲基甲酰

胺（DMF）为分析纯；试验用水为超纯水。质控样品由中国检验检疫科学研究院测试评价

处理方法主要分为液-液萃取法和固相萃取法⑺切。

液-液萃取法具有操作简单，分析周期短等优 点⑴如，试验选用液-液萃取法对食用植物油样品进 行前处理。目前，常用的TBHQ.BHA和BHT的测定方

中心提供，其中TBHQ.BHA和BHT的质量分数 分别为 41.58,66.67,43.58 mg • kg-1 o1.2仪器工作条件BDS。18色谱柱（4.6 mm X 250 mm, 5 #m）；柱 温35 °C ；流量1.0 mL • min\"1 ；进样量10 “L；检测 波长为280 nm；流动相A为0.5%（体积分数，下

法有气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱法和 液相色谱-质谱法\"2小,但上述测定方法中大多存在收稿日期：2019-02-19

-同）甲酸溶液,B为甲醇。梯度洗脱程序参考国家标 准 GB 5009.32 — 2016⑷，见表 1。基金项目：国家自然科学基金项目（31601594）；省部共建重点实验室项目（3201620）；安徽农业大学横向课题（KJ2018396）* 通信联系人。527398382@qq.com• 1215 •理化袒g鱼-但字分册汪强，等：高效液相色谱法测定食用植物油中抗氧化剂的含量表1梯度洗脱条件程序Tab. 1Gradient elution programX

时间t/

卩流动相a/

申流动相b/

、min%%裾坐回

0505055050152080乙睛 乙醇 甲醇乙ffl+DMF202080(IX】)溶液提取溶剂251090图2不同提取溶剂对3种抗氧化剂回收率的影响275050Fig. 2 Effect of different extraction regents on the

355050recovery of the 3 antioxidants1.3试验方法率均在95%以上；以乙月青、乙醇、甲醇为提取溶剂

称取0.500 0 g质控样品置于15 mL具塞离心

时，质控样品中TBHQ.BHA和BHT的回收率均 管中，加入提取溶剂乙睛-DMF(10 + l)溶液5 mL, 在95%以下。试验选择的提取溶剂为乙月青-DMF

密塞，涡旋振荡20 min,以6 000 r • min-1的转速离

(10+1)溶液。心5 min,取上层清液于50 mL离心管中，再用相同

2.3振荡提取时间的选择的操作步骤重复提取3次，合并上清液，于40 °C下

试验考察了振荡提取时间分别为5,10,20,

吹氮至近干，用乙ffi-DMF(10 + l)溶液溶解残渣并 40 min时对质控样品中TBHQ.BHA和BHT回 定容至5.0 mL,得到待测液，经过0.22 有机微

收率的影响，结果见图3。孔滤膜过滤，按照仪器工作条件进行测定。2结果与讨论2.1色谱行为槪宝回

按照试验方法对10 mg • L-'的TBHQ.BHA

-•- TBHQ-«-BHA和BHT混合标准溶液进行测定，色谱图见图1。BHT0

5

10 15 20 25 30 35 40 45t/min图3不同提取时间对3种抗氧化剂回收率的影响Fig. 3 Effect of different extraction time on therecovery of the 3 antioxidants由图3可知：随着振荡提取时间的延长，3种抗 氧化剂的回收率呈现增大趋势；当振荡提取时间为

图1 3种抗氧化剂混合标准溶液的色谱图20 min时，3种抗氧化剂的回收率达到较大值；继续

Fig. 1 Chromatogram of mixed standard solution延长振荡提取时间，3种抗氧化剂的回收率基本保 of the 3 antioxidants持不变。试验选择的振荡提取时间为20 min。2.4工作曲线和检出限2.2提取溶剂的选择按照试验方法对混合工作溶液系列进行测定,

试验考察了分别以乙月青、乙醇、甲醇、乙睛-

以TBHQ.BHA和BHT的质量浓度为横坐标，与 DMF(10 + l)溶液为提取溶剂时对质控样品中

其对应的峰面积为纵坐标绘制工作曲线。结果表

TBHQ.BHA和BHT回收率的影响，结果见图2。明：TBHQ.BHA和BHT的质量浓度均在10 ~

由图2可知：以乙睛-DMF(10 + l)溶液为提取 100 mg • L\"内与其对应的峰面积之间呈线性关 溶剂时，质控样品中TBHQ.BHA和BHT的回收

系，线性回归方程和相关系数见表2。・1216・理但越驰-佗字分册汪强，等：高效液相色谱法測定食用植物油中抗氧化剂的含量对空白样品平行测定20次，计算标准偏差s, 以3倍的标准偏差与工作曲线的斜率仏)之比计算 方法的检出限(3s〃)，结果见表2。表2线性参数和检出限内精密度是通过在1 d内按照试验方法对质控样品 平行测定6次，计算测定值的相对标准偏差(RSD)

来表示；日间精密度是通过在10 d内按照试验方法

对质控样品连续测定，计算测定值的RSD来表示。 结果表明:TBHQ的日内RSD为1.5%,日间RSD

Tab. 2 Linearity parameters and detection limits化合物线性回归方程相关系数检出限XV/

为2.4%；BHA的日内RSD为1.1%,日间RSD为

(mg • kg^1 )2.3% ； BHT的日内RSD为1. 3% ,日间RSD为

TBHQ ^ = 7.542X103x-3.104X1030.999 80.999 90.999 816.914.12.5%。说明方法具有良好的精密度。2.6 回收试验分别称取花生油、芝麻油、菜籽油、大豆油等

BHAj/ = 7.133X103x —1.809 X103BHT= 4.820X 103x —2.435 X 10317.94种阴性样品0.500 0 g,按照试验方法对其进行不

2.5精密度试验试验分别考察了日内精密度和日间精密度，日

同浓度水平的加标回收试验，计算回收率，结果见

表3。表3 回收试验结果Tab. 3 Results of test for recovery花生油芝麻油菜籽油回收率/大豆油化合物加标量m/MS测定值祝/回收率/测定值m/测定值ml回收率/测定值加/回收率/%%TBHQ10.00%9.5595.595.595.397.297.297.495.796.2Pg9.58%9.5395.395.695.595..5195.195.230.002&6885.952&652&6285.759.7229.2095.495.397.297.397.295.22&5685.6290.00BHA85.779.7295.110.0030.0090.00

9.7197.197.397.696.296.296.39.7529.2287.57.597.497.395.729.19

87.8429.1687.669.572&8687.529.52BHT10.009.629.572&8486.6830.0090.002&8686.672&8486.3296.196.196.386.4996.195.92.7 方法比对按照试验方法对质控样品进行测定，并与国家

5009. 32 一 2016⑷相比，具有高效、准确、环保等

优点。标准方法GB 5009.32 — 2016⑷的测定值进行比较， 结果见表4。表』采用不同方法得到的质控样品分析结果参考文献：[1]

丁明珍，马少玲，彭璟.高效液相色谱法测定食用油中 特丁基对苯二酚[J].理化检验-化学分册，2018,54

Tab. 4 Analytical results of quality control sampledetermined by different methods(11):1272-1275.化合物认定值w/回收率/%[2]

续颖，刘雪莹，伍釜，等.髙效液相色谱法测定食用植物 油中TBHQ、BHA、BHT含量[J].安徽农业科学，

(mg • kg-1)41.58

66.6743.58本法国家标准方法2017,45(18):-90.E3]湛嘉，俞雪钧，黄伟，等.复杂基质食品中7种添加剂的

气相色谱/质谱检测方法[J].分析科学学报，2008,24TBHQBHA8&59&297.73.497.114.45BHT:729-731.(6)[4] 凌关庭.食品添加剂手册-上册[M].北京：化学工业出

本工作以乙月青-DMF(10+l)溶液为提取溶剂， 采用高效液相色谱法测定食用植物油中TBHQ、

版社，19.[5] GB 2760-2014食品安全国家标准食品添加剂使用

标准[S].BHA和BHT的含量。该方法与国家标准GB・1217・A[7]

理但检验-但字分册汪强，等：高效液相色谱法测定食用植物油中抗氧化剂的含量[6] GB 5009.32-2016食品安全国家标准食品中9种抗

氧化剂的规定[S].食品中的TBHQ.BHA和EHT[J].食品工业，2015,

36(7):273-275.孟磊，谢黎霞，苏惠.反相高效液相色谱法测定儿童饼 干中8种抗氧化剂[J].理化检验-化学分册，2013,49[14]

刘年丰，涂一名，夏虹•等.高效液相色谱法测定油脂 中抗氧化剂BHA、TBHQ[J].分析科学学报，2003,

(10) :1261-1263.[8]

李秀勇，牟峻，刘惠涛，等.超高效液相色谱-质谱法测 定油脂中的10种抗氧化剂[J]・分析化学，2008,36

19(6):549-551.[15] 蔡林森，秦文杰.亚麻油中TBHQ.BHA和BHT的同 时快速检测[J].粮食与油脂，2017,30(10):87-.(3):369-372.[9]

丁明珍，马少玲，彭璟.高效液相色谱法测定食用油中 特丁基对苯二酚口]•理化检验-化学分册，2018,54E16]胡小钟，余建新，孙国保，等.用高效液相色谱法同时

测定油脂中的9种抗氧化剂[J] •分析测试学报，

1999,18(5):21-24.(11) :1272-1275・[10] KAROVICOVA J, SIMKO P. Determination of syn­

[17] 岳振峰，谢丽琪，吉彩霓.油脂及其制品中BHA、

BHT.PG和TBHQ快速测定方法的研究[J].食品与

发酵工业，2002,28(10):49-52.thetic phenolic antioxidants in food by high-perform­

ance liquid chromatography [J ]. Journal of Chroma­tography A, 2000,882(1/2):271-281.[18]

金瑚，熊巍林，包李林，等.硅胶固相萃取-高效液相色

谱法测定植物油中的特丁基对苯二酚含量口].食品

[11]

熊巍林，包李林，邹燕娣，等.固相萃取-高效液相色谱 法测定植物油中的TBHQ含量[J].中国油脂，2017,

与发酵工业，2018,44(1):258-261.[19]

陈毓芳，奚星林，李宪华，等.高效液相色谱法同时测

42(10):143-145.口2] XU S J, LIU L L, WANG Y Q, et al. Simultaneous

定食用油脂中叔丁基对苯二酚和叔丁基对径基茴香

KEJ1 中国卫生检验杂志,2007,17(7):1163-11.determination of six synthetic phenolic antioxidants in edible oils using dispersive liquid-liquid microextrac­tion followed by high-performance liquid chromatog­raphy with diode array detection]J]. Journal of Sepa­

[20] [21]

吴永宁.现代食品安全科学[M].北京：化学工业出版 社，2003.刘萍，李晓，章思倩，等.有机相阴离子交换SPE-UP-

LC-UV法快速测定食用植物油中的抗氧化剂TBHQ

和 BHAEJ1 化学试剂，2017,39(6):637-2.ration Science» 2016,39(16):3205-3211.[13]李满秀，赵娟，郑红利，等.高效液相色谱法同时测定

・1218・