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雅心重组抑肽酶与sigma提取抑肽酶比较

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雅心重组抑肽酶(RTI16)与sigma提取抑肽酶(A1153)比较实验目的:比较雅心重组抑肽酶(货号RTI16,批号:RTI161101)与sigma抑肽酶(货号A1153,批号:SLBP2656V)在比活性、吸光度、酸度、纯度等方面的异同。实验方法:1、蛋白含量、比活性、吸光度测定,酸度检测称取一定量的两种酶的粉末,分别用纯水溶解,配制成2.5mg/ml的酶液,按照吸光系数法测定蛋白含量,其中A280nm,1cm(1mg/ml)=0.84,活性测定按照SOP操作,计算比活性。将酶液稀释成3EPU/ml,277nm下测定吸光度,要求不大于0.8。测定酶液的酸度。2、HPLC纯度测定①选择分子筛分析柱为TSK-GELG2000SWXL②该柱子的pH范围为2.5-7.5,速度范围为0.5-1.0ml/min(最高可为1.2),温度范围10-30℃,洗脱液盐浓度小于0.5M③检测波长280nm④根据以上两点设计方法如下表:方法分子筛pH5.8流速ml/min温度℃125洗脱液0.1MHAC-NaAC,pH5.8,0.1MNaCl⑤其他方法按照液相SOP进行操作⑥上样量均是20ug⑦样品处理:纯水溶解冻干粉实验结果:1、蛋白含量、比活性、吸光度和酸度蛋白含量雅心RTISigma抑肽酶72%76.9%比活性EPU/mg3.713.56吸光度0.5050.526酸度pH5.0-7.05.0-7.02、HPLC纯度①雅心重组抑肽酶(RTI161101)②sigma提取抑肽酶(货号A1153,lotnumber:SLBP2656V)实验结论:1.两种蛋白在蛋白含量、比活性、吸光度和酸度方面都基本一致,其中雅心重组抑肽酶(RTI161101)比活性略高于sigma抑肽酶(A1153)。2.HPLC纯度:雅心重组抑肽酶(RTI161101)比sigma抑肽酶(A1153)峰形更集中,两者纯度均为100%。

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