巨噬细胞的纯化

一、用帖壁法纯化巨噬细胞

1．用含20％～40％小牛血清的RPMI-10培养液将巨噬细胞配成2×106～4×106/ml的浓度。以每平方厘米2×105～4×105个巨噬细胞的密度将细胞悬液接种到玻璃培养皿（瓶）或塑料培养皿（瓶）中。37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养1小时或24小时。1小时培养节省时间但会丢失一些粘附力弱的巨噬细胞，而24小时可以得到较多的巨噬细胞。20％～40％的小牛血清可以减少B淋巴细胞的粘附。

2．摇晃培养皿（瓶），悬浮未粘附细胞，吸出细胞悬液。用预温的Hanks液洗涤细胞3～4次。悬浮细胞可重复粘附，得到更多巨噬细胞。用适量含2.5mmol/L EDTA的无钙镁Hanks液消化细胞37℃ 15～30分钟。用吸管吹打分离细胞，离心250×g 10分钟，去上清液。

3．用预冷的Hanks液洗涤细胞3～4次，每次离心250×g 10分钟，去上清液。最后用含10％小牛血清的RPMI-10培养液悬浮细胞，台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力，将细胞配成所需的浓度。

二、用不连续密度梯度离心纯化巨噬细胞

1．取15ml离心管，将制备好的各浓度密度梯度材料按下浓上淡的顺

序依次分层加在离心管中，每个浓度2ml。最后加上上述巨噬细胞悬液3～5ml（约含2×107～5×107细胞）。

2．4℃中，水平离心1000×g 30分钟，垂直取出离心管，小心吸出

各交界面的细胞。分别用预冷的含1％小牛血清RPMI-10培养液洗涤各交界面细胞2次，每次200×g 10分钟。用含10％小牛血清的RPMI-10培养液将细胞配成所需的浓度。