DNA的粗提取与鉴定
一、实验目的
1.初步掌握DNA的物理化学性质 2.了解二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。
二、实验原理
DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl的浓度的变化而改变，DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，利用这一原理可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的很多物质可以溶于酒精，利用这一原理，可以进一步提取出较为纯净的DNA。
DNA遇二苯胺（沸水浴）会变蓝，因此，二苯胺可以做为鉴定DNA的试剂。
材料：鸡血细胞液。
器材：塑料的烧杯和试管、玻璃棒、胶头滴管。
试剂：蒸馏水、95%乙醇（冷）、二苯胺试剂、NaCl溶液（2 mol/L）。
三、实验用品
四、实验步骤
1.释放DNA 用塑料烧杯取5 mL的鸡血细胞液，加入20 mL蒸馏水，用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5 min，但不能太快太猛，防止打碎DNA。用3～4层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质。
2．溶解DNA 在溶液中加入40mL 2 mol/L NaCl溶液，轻轻搅拌1 min。注意应沿一个方向搅拌，使DNA充分溶解。
3．DNA的析出 缓慢贴壁加入蒸馏水，大约200-300mL，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕。当出现大量丝状物时，停止加入蒸馏水。
所得悬浊液离心（4 000 r/min、15 min），弃上清液。
4.DNA的初步纯化 在沉淀中加入20 mL 2 mol/L的NaCl溶液，沿一个方向不停搅拌3 min，使DNA充分溶解。离心（4 000 r/min、15 min），去上清液。在沉淀中贴壁缓慢加入50 mL预冷的体积分数为95％的乙醇，并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌，溶液中会出现DNA丝状物。
5．DNA的鉴定 取少量丝状物于试管中，加入2mL蒸馏水使其溶解。加入2mL二苯胺试剂，沸水浴10min，观察颜色。
五、预期实验结果
观察提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误。
注：鸡血细胞液的配制
取质量浓度为0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液100 mL，置于500 mL烧杯中，注入新鲜的鸡血（约180 mL），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合。离心（2 000 r/min 2 min），弃上清液。
另外，鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。
