维普资讯 http://www.cqvip.com 肝胆外科杂志２００２年１１旦筮 鲞筮 ！塑 』旦！ ！ ｂｊ ！ 墨 堡！ ！ ！ ： ！ ： ！ ・短篇论著・ 器官保存液对大鼠肝脏细胞 凋亡的影响的研究 宋少伟 刘永锋梁健何三光 细胞凋亡存在于多种生理变化过程中，越来越 显著低于ＵＷ组（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．０５）；３０ ｍｉｎ时 受到重视，本实验的目的旨在探讨不同的器官保存 Ｃｅｌｓｉｏｒ和ＨＴＫ组均显著低于ＵＷ组（Ｐ＜０．０１；Ｐ 液在大鼠肝脏缺血再灌注损伤过程中，对细胞凋亡 ＜０．０５）；６０ ｍｉｎ时Ｃｅｌｓｉｏｒ和ＨＴＫ组均显著低于 的影响。 ＵＷ组（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．０１）；９０ ｍｉｎ时Ｃｅｌｓｉｏｒ组 １．材料与方法：６９只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重为 显著低于Ｕｗ组（Ｐ＜０．０１；表１）。（２）经过２４ ｈ的 ２５０～３５０ ｇ，随机分成Ｕｗ、Ｃｅｌｓｉｏｒ和ＨＴＫ组。 低温保存后，再灌注开始时，Ｃｅｌｓｉｏｒ组显著低于 根据低温保存０（，２—５）、８（，２—６）、１６（，２—６）和２４ ｈ ＨＴＫ（Ｐ＜０．０１）和ＵＷ组（Ｐ＜０．０１）；１５ ｍｉｎ时 （ 一６）再分成４个亚组。快速切取大鼠肝脏，低温 Ｃｅｌｓｉｏｒ组显著低于ＨＴＫ（Ｐ＜０．０１）和ＵＷ组（Ｐ＜ （４℃）保存于ＵＷ、Ｃｅｌｓｉｏｒ和ＨＴＫ中０、８、１６、２４ ｈ ０．０１）；３０ ｍｉｎ时Ｃｅｌｓｉｏｒ组显著低于ＨＴＫ（Ｐ＜ 后，采用大鼠肝脏离体常温灌注模型。再灌注０， ０．０１）和ＵＷ组（ＰｄＯ．０１）；６０ ｍｉｎ时Ｃｅｌｓｉｏｒ组显 １５，３０，６０，９０ ｍｉｎ时，留取灌洗液检测细胞凋亡。 著低于ＨＴＫ（Ｐ＜０．０５）和ＵＷ组（Ｐ＜０．０５）；９０ 采用ＥＬＩＳＡ方法测定与组蛋白相关的ＤＮＡ片段 ｍｉｎ时Ｃｅｌｓｉｏｒ组显著低于ＨＴＫ（Ｐｄ０．０５）和ＵＷ 检测细胞凋亡；表示为ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｆａｃｔｏｒ一标本的 组（Ｐｄ０．０１；表２）。 吸光率／阴性对照的吸光率。统计学处理：实验数 ３．讨论：过去，减轻缺血再灌注损伤的方法主 据以均数±标准差表示，组间比较采用Ｏｎｅ ｗａｙ 要着眼于减轻同坏死有关的生化和组织学变化。而 ＡＮ０ＶＡ检验。 关于细胞凋亡在缺血再灌注损伤中的作用了解甚 ２．结果：（１）经过８ ｈ的低温保存时限后，再灌 少。最近的研究表明细胞凋亡有可能是造成肝脏缺 注开始时，在Ｃｅｌｓｉｏｒ组细胞凋亡的发生显著低于 血再灌注损伤的主要机制之一。氧自由基除直接损 ＵＷ组（Ｐ＜Ｏ．０５）；１５ ｍｉｎ时Ｃｅｌｓｉｏｒ和ＨＴＫ组均 害细胞外，还可以间接激活细胞内核酸内切酶，导致 表１低温保存８ ｈ后再灌注期间细胞凋亡的变化 作者单位：１１０００１沈阳市，中国医科大学附属第一临床医院器官移植科 维普资讯 http://www.cqvip.com 肝胆外科杂志２００２年 旦筮 鲞筮 塑 』 ！ ！ 堡！ ！ ！ ： ！ ： 缺血再灌注时的细胞凋亡，有研究表明再灌注时，氧 后，彼此之间无明显的差别。但在２４ ｈ后，Ｃｅｌｓｉｏｒ 自由基对线粒体的损害可以产生凋亡诱导因子造成 明显优于ＨＴＫ和ＵＷ。另外一个有趣的结果是在 细胞凋亡。Ｂｕｒｎｓ等 证实肾小管的凋亡在低温缺 开始再灌注时细胞凋亡的现象明显多于再灌注ｌ５ 血尤其是长时间缺血损伤中起着重要作用。尽管一 ｍｉｎ后，这可能因为在开始再灌注时低温保存产生 些临床移植表明细胞凋亡只发生在再灌注ｌ ｈ 的凋亡细胞被冲入循环灌注系统，而１５ ｍｉｎ后，它 内 ：，但一些实验研究表明凋亡可在再灌注后相当 们被稀释，经过３０～６０ ｍｉｎ的再灌注后，再灌注又 一段时间内存在一ｓ 。最近的两项研究提供了更加直 产生新的凋亡细胞，所以凋亡现象又明显出现。 接的佐证，Ｇａｏ等 发现低温保存的大鼠肝脏由于 乏氧引发蛋白酶的释放，这些蛋白酶作用于肝窦内 参考文献 皮细胞的基质和细胞膜导致内皮细胞与肝窦板的分 离而变圆；内皮细胞代谢能力的降低使其失去进一 步分化的能力，同时低温保存时钙离子的增加导致 了肝窦内皮细胞的凋亡，且发生凋亡的程度同移植 物的活性密切相关。因此，也表明肝窦内皮细胞的 凋亡是造成移植物原发无功能的关键原因。还有研 究表明，在大鼠肝脏离体灌注模型中Ｅｕｒｏ—Ｃｏｌｌｉｎ液 中加入抗凋亡成分低温保存２４ ｈ后胆汁分泌量、门 脉流速、肝细胞耗氧量和肝组织干湿重比明显增加， 而凋亡小体数目、门脉阻力和ＳＧＰＴ、ＳＧＯＴ值却明 显下降一ｓ 。因此表明保存液中加入抗凋亡成分更加 利于保存。本实验从细胞凋亡的角度来看，经过８ ｈ的低温保存后，Ｃｅｌｓｉｏｒ和ＨＴＫ优于Ｕｗ，１６ ｈ ～～一 一一一 一一血一 一＝一墨＿一吞 一 ．～一日 一一期 奥曲肽对肝部分切除术后大鼠 肝再生影响的实验研究 邹卫龙许戈良 李建生 易述红徐荣楠 生长抑素（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ，ＳＳＴ）及其类似物作为 ～一～一 ～一 一 ～似物奥曲肽（ｏｃｔｒｅｏｔ一～一 一～～一 一一～～一 ｉｄｅ）对单纯性肝切除和切除后 ～一 一种新的抗肿瘤药物已经在临床肿瘤辅助治疗中取 种植性荷瘤大鼠的残肝再生、肝功能的影响，了解生 得了肯定的疗效，也有大量实验和初步临床研究表 长抑素在手术后应用的安全性。 明其在肝癌中的应用价值。但生长抑素固有的抑制 材料与方法 特性能否对手术创伤后病人或实验动物的残肝再生 和肝功能恢复带来负面影响，在抑制肿瘤生长、促进 １．主要试剂和仪器：奥曲肽注射液（０．１ｍｇ／支） 肿瘤细胞凋亡的同时对于手术后个体的应用安全性 由瑞士诺华公司提供，ＤＮＡ ｐｒｅｐ试剂盒（ｃａｔ．２５８５） 成为医务工作者必须面对的问题。本实验以大鼠肝 和ａｎｎｅｘｉｎＶ－ＰＩ试剂盒（ｃａｔ．６６０７０５５）均购自Ｂｅｃｋ— 切除术后种植性肝癌为模型，探讨生长抑素８肽类 ｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ公司（美国）。流式细胞仪为美国 Ｃｏｕｌｔｅｒ公司产品，ＥＰＩＬＣＳ－ＸＬ－ＭＣＬ（ｓｏｆｔｗａｒｅ２ 作者单位：２３０００１合肥市，安徽医科大学９９级普外科研究生，导师 许戈良及其余作者系安徽省立医院普外科 ｓｙｓｔｅｍ）。检测前常规进行光一流路质控检测和双色 荧光补偿，以大鼠正常二倍体肝组织为内标，以此为
