中国实验诊断学２０Ｏ９年１月第１３卷第１期 ・－－——１３７・——— ［１９］Ｓｈｅｎ ＫＺ，Ｌａｇｒｕｔｔａ Ａ，Ｄａｖｉｅｓ ＮＷ，Ｓｔａｎｄｅｎ ＮＢ，Ａｄｅｌｍａｎ ＪＰ，Ｎｏｒｔｈ ＲＡ． ｔｅｉｎａｓｅ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ ａｔｔｈｅＣＯＯＨｔｅｎｎｉｔｌｕ８ｏｆＳｌｏ，ｑ￣￣ｃａｌｃｉｍｕ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔｅｔｍｅｔｈｙｌａｎｍ＇，ｔｍｉｕｍ ｂｌｏｃｋ ｏｆ Ｓｌｏｗｐｏｋｅ ｃａｌｃｉｕｍ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｉｍｔｓｅｓｉｍｕ ｃｈａｎｎｅｌｓ［Ｊ］．Ｇｅｎ Ｐｈｙ￣ｏｌ，１９９６，１０８（６）：４７３． ｃｈａｎｎｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ Ｘｅｎｏｐｕｓ ｏｏｅｙｔｓｅ：ｅｆｆｃｌｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｅｔｒａｍｅｆｉｅ ｃｈａｎｎｅｌ ［２２］＆ ｅｎｔ ＣＡ，Ｇｒｏｖｅ￣ＧＪ，Ａｎｔｎｏａｃｃｉｏ ＭＪ，ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ ＪＲ．Ｔｈｅ ｃａｒｄｉｏｐｒｏ— ｆｏｍｍｆｉｎｏＥＪ］．Ｐｆｌｕｇｅｒｓ Ａｒｃｈ，１９９４，４２６（５）：４４０． ｔｃｏｔｉｖ￣，ｖａｓｏｒｅｌａｘａｎｔ ａｎｄ ｄｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐＰ０￣ｌ￣ｏｆｔｈｅ １ａ ｃｏｎｄｕｅ— ［２０］Ｈａｒｖｅｙ ＡＬ，Ｖａｔａｒｑａｎｏｒ Ｈ，Ｒｏｗａｎ ＥＧ，Ｐｉｎｋａｓｆｅｌｄ Ｓ，Ｖｉｔａ Ｃ，Ｍｅｎｅｓ Ａ， ｔａｎｅｅ ｃａｌｃｉｕｍ－ａｃｔｉｖａｂ￣ｄ ｏｐｔａｓｓｉｍｕ ｃｈａｎｎｅｌ晖 Ｎｓ－０ｏ４［ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｍａｒｔｉｎ Ｅａｕｃｌａｉｒｅ ＭＦ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－￣￣ｔｌｖｉｔｙ ｓｔｕｄｉｓｅ ｏｎ ｓｃｏｒｐｉｏｎ ｔｏｘｉｎｓ ｔｈａｔ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ，１９９３，２６６（３）：１４２２． ｂｌｃｏｋ ｏｐｔａｓｓｉｍｕ ｃｈａｎｎｅｌｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｎ，１９９５，３３（４）：４２５． ［２３］Ｓｃｈｕｂｅａ Ｄ，Ｋｌｉｅｒ ｆＥ．ｓＩｌｂｓｂｍｎｌｍ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆｎｅｕｒｉｔｅ ｆａｓｃｉｃｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］． ［２１］Ｍｏｓｓ ＧＷ，Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｊ，Ｍｏｃｚｙｄｌｏｗｓｋｉ Ｅ．Ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ ｆｏｒ ａ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏ－ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，１９９１，５４９（２）：３０５． （收稿日期；２００７—１１—１１） 文章编号：１００７—４２８７（２００９）０１—０１３７—０４ 铜绿假单胞菌生物被膜研究进展 张连波 ，高庆国 ，张广 （１．吉林大学中１３联谊医院整形外科；２．甲状腺外科，吉林长春１３００３３） 细菌生物被膜（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｂｉｏｉｆｈ＝）是指细菌黏附 蛋白、多糖基质、纤维蛋白、脂蛋白等多糖蛋白复合 于惰性或者活性实体表面、繁殖、分化并分泌大量胞 物，与物体表面受体聚集在一起黏附于其表面，粘结 外多聚基质包被其外形成的微菌落聚集体，是细菌 单个细胞形成微菌落，它们中的一些或全体是细菌 相互粘连并将其自身克隆聚集缠绕其中形成的膜样 寄居的受体。可以以静电力非特异或特异的粘连方 物［１１。这些物质可以是无生命的物质或有生命的物 式在细胞之间或细胞与表面粘连，一旦粘连于基质 质如给排水管道、生物材料及植入的各种导管、人体 则形成大量的不溶解的细胞外聚合物，这些细菌聚 组织表面如牙龈、支气管、尿道等 Ｊ。临床上许多难 合物能够混合其他种类的细胞外多聚体、宿主细胞 治性感染与此相关，它在院内感染中占到了６ｏ％以 或血小板形成混合的生物被膜，抵抗宿主的免疫反 上【３，３ｊ是细菌为适应环境、有利于生存而特有的生命 应及抗生素的攻击。藻酸盐被铜绿假单胞菌在活体 现象。然而游离的单个细胞却是实验室的主要研究 内产生，而且藻酸盐抗体在铜绿假单胞菌感染住院 对象［ 。早在１９４３年，Ｚｏｂｅｌｌ就提出生物被膜并对 病人体内检测到 ５，这些多糖藻酸盐结构主要成份 其进行过描述，生物被膜相关理论是１９７８年由 是甘露糖醛酸和古洛糖醛酸【６６。研究表明铜绿假单 ＪＣｏｓｔｅｒｔｏｎ等人首次提出的，但直到２０世纪８０年代 胞菌可以分成粘液型及非粘液型两种表型，粘液型 初，人们才对生物被膜进行深入的研究，１９８７年他 铜绿假单胞菌可借助其表面分泌的藻酸盐，而黏附 又报道了细菌生物被膜的致病特性。 于异物表面。Ｓａｕｅｒ Ｋ等在流动的介质中建立的铜 据报道无论哪种细菌在成熟条件下都可以形成 绿假单胞菌生物被膜模型，发现粘液型菌株的生物 生物被膜，一种生物被膜可由同种或不同种微生物 被膜为塔状或蘑菇状，非粘液型菌株的生物被膜为 形成。生物被膜的性质不同于浮游有机体，生物被膜 薄膜状［ 。藻酸盐是由甘露糖醛酸以６－１，４糖苷键 对抗生素及宿主的免疫反应是不敏感的，临床上发现 连接而成的多糖醛酸，与多数多糖一样，经强酸处理 即使反复试验证明有效的药物，但也不能清除生物被 可脱水生成糠醛或其衍生物，再与酚类、胺类化合物 膜，导致感染迁延不愈，浪费了大量的人力及物力，形 作用，生成有特殊颜色的物质，从而得以定量。 成了公共卫生问题，因而有关生物被膜的研究亦日益 据报道生物被膜中的结构细菌及粘附的基底层 增多起来。本文拟对铜绿假单胞菌生物被膜做以综 均带负电荷，互相排斥，但因为范德华力和疏水力可 述，为铜绿假单胞菌病因学的研究提供参考。 使细菌靠近基底层面便于其粘附，同时粘附素与受 １生物被膜的组成成分 体之间的作用也促进细菌粘附，接着细菌分泌细胞 生物被膜的组成成分包括粘液多糖蛋白及表面 外基质与基底层牢固结合，使粘附更牢固而不可逆； 此外，由于大多数多糖蛋白复合物带负电荷，可从周 ＊通讯作者 围环境中吸引各种有机物或无机物，所以不同细菌 一１３８一 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｌａｂ Ｄｉ蜊，Ｊａｎｕａｒｙ，２００９。Ｖ０ｌ １３，Ｎｏ．１ 及不同环境下生物被膜形态有所不同，如铜绿假单 细菌产生的水解酶如ｊ３一内酰胺酶、过氧化氢酶等被 胞菌表面形成一种柔韧的、有一定厚度的、并突向介 质内的多糖蛋白复合物；而克雷伯杆菌的多糖复合 吸附其上，也可水解或钝化一部分抗菌药物，从而使 渗入并接触生物被膜的抗菌药物大大减少，达不到 物则僵硬且均匀完整地分布于细菌表面；然而不同 生物被膜却有着相似的结构，都由水化的多阴离子 基质和不同浓度的包绕于其中的细菌细胞所组成。 ２生物被膜的形态学 抑菌、杀菌浓度；另外，多糖蛋白复合物还可以延缓 大多数抗菌药物的扩散，并且其溶解物在生物被膜 内的扩散要远比其在水中的扩散慢【１０］，所以细胞外 ７Ｏ年代通过扫描电镜观察到了细菌生物被膜 的存在，显示生物被膜为纤维膜或薄膜样结构；被钉 蛋白多糖的屏障作用曾被认为是生物被膜耐药的主 要机制。但是当蛋白多糖的结合位点饱和、灭活酶 消耗尽时抗菌药物仍能进入内部，甚至到达深层，但 红染色及透射电子显微术证实生物被膜的特征是细 胞外多聚体而不是细胞Ｌ８Ｊ，为多糖包围细菌，电子显 微镜下显示细的丝状物质连接细胞于表面或者是大 片的非晶状物质在表面；ＳＥＭ显示与基质相似的结 构或者带有铜绿假单胞菌聚集物的细菌絮状物，这 些结构符合多糖的分析Ｌ９ｊ，显示野生型铜绿假单胞 菌生物被膜呈大片状较厚，有孔状通道的成熟生物 被膜结构，而ＲｈｌＲ／ＬａｓＲ或Ｌａｓｌ／ＲｈｌＩ突变株生物被 膜则是稀薄的；细菌生物被膜被结晶紫染色后，共焦 点显微镜可以观察含水的横的或垂直的生物被膜切 片以及有生命的生物被膜结构，且分析是无害的，以 原位观察活体生物被膜时，发现生物被膜并非一层 致密的膜，而是内有相互交通的水通道，代谢产物也 可以经此排出，能运送直径０．３ ｐ．ｍ物质通过生物被 膜，生物被膜内水通道及其内液体对流的发现是生 物被膜结构认识上的重大突破。有人认为水通道类 似于高级生物的循环系统，足以让细菌生长需要的 营养物质进入被膜深层，代谢废物也可由此排出；然 而ＣＬＳＭ不能应用于不透明的材料中，而且ＡＴＰ生 物发光及光比色法也不适用于生物被膜的定量研 究［１０ 】。 ３生物被膜中的细菌对抗茵药物抵抗的原因 细菌在生物被膜中是抵抗抗生素的，即使针对 微生物的最小有效抑菌浓度对生物被膜来说也是低 的，在生物被膜中的铜绿假单胞菌可以耐受１０００～ ２０００倍的浮游菌ＭＩＣ的浓度Ｈ 。显示生物被膜是 细菌抵抗抗生素的主要因素，具体的耐药机制还不 是很清楚，可能与以下因素有关： ３．１细胞外蛋白多糖（ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＥＰＳ）的屏 蔽作用生物被膜的特有结构带有大量的阴离子， 可以通过氢键、共价键、范德华力吸附一部分带有阳 离子的抗菌药物，阻止抗菌物质的渗入；并能结合、 滞留一部分抗菌药物而削弱其杀菌作用；而且还带 有许多钝化酶、水解酶、过氧化氢酶而能灭活部分抗 菌药物；同时，许多易于固定在多糖蛋白复合物上的 还是无法消灭生物被膜，故还可能有其他的耐药机 制存在。 ３．２生物被膜中细菌的生理状态在生物被膜内 细菌具有较多的代谢状态，因而在不同条件下均可 有部分菌存活［３，１２Ｊ，在生物被膜表层的细菌容易获 得营养而代谢相对活跃，菌体相对较大，与浮游菌性 质相似。但细菌的毒力总体下降，这是所有生物被 膜菌的共同特性，因为在生物被膜深层的细菌繁殖 能力弱且体积小，被多糖蛋白复合物包绕而与外界 沟通机会少，自然获取的营养也少，且其代谢产物堆 积，所以基本上处于一个低营养物质、低氧分压及高 代谢产物的微环境，因而细菌生长速度缓慢，大多数 处于Ｇｏ期；一部分细菌呈类似芽孢菌的分化状态， 代谢活性低，几乎处于休眠状态。生物被膜内细菌 对各种物理、化学、生物学等应激反应不敏感，自然 对药物也不敏感［ｎＪ。除了细菌本身生理状态差异 外，特定营养成分的缺失也可以影响细菌的生理状 态，如在缺镁的情况下铜绿假单胞菌对氨基糖苷类 药物、多粘菌素Ｂ和ＥＤＴＡ的耐药性显著升高；此 外，生物被膜周围的钙质、血小板、红细胞及纤维蛋 白的沉积，也可增强生物被膜的强度，促使其耐药。 ３．３生物被膜对抗生素及消毒剂的抵抗特性单 个生物被膜中可有多种微生物共生，彼此具有协同 保护作用，如产生Ｂ一内酰胺酶的菌种可保护不产生 此酶的微生物免遭青霉素杀伤，同时生物被膜具有 使抗氧化剂，次氯酸盐，过氧化氢等失活的能力，且 其失活的速度高于其生物被膜扩散的速度，使生物 被膜内的细菌得以启动耐药基因，如抗生素水解酶 的表达【 引。 ３．４藻酸盐的作用 藻酸盐是生物被膜的主要成 分之一，它的机械屏障作用是其抗药的机制之一，可 以使原来敏感的抗生素很难穿透藻酸盐膜，无法与 细菌接触；此外，还可通过氢键、范德华力、共价键吸 附一部分抗菌药物；藻酸盐还可以直接抑制中性粒 细胞、巨噬细胞趋化及吞噬作用，引起免疫逃逸；阻 中国实验诊断学２ＯＯ９年１月第１３卷第１期 断中性粒细胞的钙通道，同时避免与巨噬细胞相互 作用，使中性粒细胞不能表达与趋化性有关的受体， 趋化性减弱，菌膜周边组织的炎性反应减弱，白细胞 释放因子减少；藻酸盐有很强的免疫原性，刺激机体 发生免疫反应，产生ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＦＮ一７及白细胞源性 Ｂ４产物，刺激炎症反应。 ３．５生物被膜的分散临床上在治疗细菌感染性 疾病时显示临床治愈，但其体内的细菌并未清除掉， 当身体抵抗力降低、停用抗生素及外界环境改变时， 这些细菌又从生物被膜中游离出来，加速繁殖，引起 再次感染发作，如生物被膜的特殊结构具有使细菌 从成熟生物被膜的脱落、分散的特性，与临床感染性 疾病的难治性有很大关系。 ４影响生物被膜形成的因素 ４．１细菌附着于固体及液体表面的时间 微生物 必须长时间附着于固体或液体的表面以产生不可逆 的附着，Ｈｉｎｓａ等证实开始的生物被膜是松弛的不稳 定的可逆性附着，随后变为稳定的不可逆的黏 。５ｌ。 ４．２鞭毛及其摆动功能是形成生物被膜的必要因 素铜绿假单胞菌具有悬浮及涌动的能力，即四型 鞭毛介导的表面粘着能力，这些能力促进细菌的寄 居而促成致病过程。铜绿假单胞菌Ⅳ型纤毛是由 １５ ＫＤａ的菌毛单体构成的，且黏着于宿主细胞也是 通过Ⅳ型纤毛，特别是介导Ⅳ型纤毛的Ｃ末端ｌｌ 。 鞭毛可以吸收结合与生物被膜形成有关的聚磷酸 脂，结合后鞭毛回缩，将聚磷酸脂运输到膜的感受器 处［１７］，纤毛介导的ＤＮＡ的结合在生物被膜形成上 也起到很重要的作用＿１８＿。 ４．３中性粒细胞促进铜绿假单胞菌生物被膜的生 物合成铜绿假单胞菌为了抵抗中性粒细胞的监 视，加速生物被膜的形成ｕ 。体外试验显示当中性 粒细胞存在时细菌贴壁增多，且生物被膜厚，加入 ＤＮＡ酶则分解肌动蛋白ＤＮＡ，且分解铜绿假单胞菌 细胞，抑制生物被膜的形成。 ４．４切力的影响许多的生物被膜在体外静止状态 下的研究被执行是为了研究铜绿假单胞菌的病原 性［ ，事实上生物被膜形成过程是有血流的作用在 其中的，因此动态的条件能够模拟真实的过程，切力 应该是评价细菌生长、附着、生物被膜形成的一个参 数 ２１，有切力的存在将影响生物被膜的形成。 ４．５生物被膜形成与Ｎｏ浓度及ＭｕｃＡ基因有关 微点阵研究显示铜绿假单胞菌暴露于ＮＯ时黏着 反应减少［笼 ；Ｙｏｏｎ［矧显示细菌寄居在缺氧的生物被 ＿＿＿——１３９－－－—— 膜内和ｒｈｌ基因缺乏时会被ＮＯ代谢自杀；Ｈ２０２可 以使ＭｕｃＡ基因突变，ＭｕｃＡ基因编码抗转录因子， 使生物被膜中的细菌向粘液型转变，ＭｕｃＡ基因突变 将减少生物被膜的形成。目前认为ＭｕｃＡ基因可以 调节藻酸盐合成基因ａｌｇＯ的表达，与藻酸盐的生物 合成有关，调节生物被膜形成【２４］。 ５密度感应系统（Ｑｕｏｍｎ ｆ￣ｌｌＳｉｌｌｇ）对生物被膜形 成的影响 最近发现ｑｕｏｒｕｍ ｓｅｎｓｉｎｇ ＱＳ系统在铜绿假单胞 菌致病因子的表达、抗生素的敏感性以及生物被膜 分化、形成上起至关重要的作用；这致病因子的产生 由细胞与细胞之间的信号调节，细菌在生长过程中 分泌一种信号分子到菌体周围环境中，而且随着细 菌数量的增多，这种信号分子分泌增加，一旦浓度到 一定阈值，即可激发一套特定基因表达，这种类型细 胞与细胞的交流叫ＱＳ调节系统。最近几年指出， 铜绿假单胞菌的许多致病因子的表达及生物被膜的 形成都是由ＱＳ系统控制的［蚓。 ６生物被膜的治疗现状 生物被膜在最近十年被大量的研究是因为两个 原因，首先细菌是怎样生长和生活的群落；第二，细 菌在生物被膜中是对抗多种消毒剂、抗生素及机体 免疫系统的。生物被膜的形成是引起慢性难治性感 染的重要因素之一，它对抗菌药不敏感并能逃避免 疫系统的清除作用，故生物被膜相关感染具有难治 性的特点。临床上许多顽固性、难治性感染可能与 生物被膜形成有关，细菌生物被膜相关感染的防治 仍是临床上一个有待解决的难题。目前应用的抗菌 药物并不能完全清除细菌生物被膜，应加强基础与 临床研究。 参考文献： ［１］Ｃｏｓｔｅｒｔｎｏ．Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｏ ｂｉｏｉｆｌｍ［Ｊ］．ｎＩｔ ＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓ，１９９９，１１（３ —４）：２１７． ［２］Ｄｏｎｌａｎ ＲＭ，Ｃｏｓｔｅｒｔｎｏ ＪＷ．Ｂｉｏｉｆｌｍｓ：ｓｕｒｖｉｖａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｒｅ１ ｅｖａｎｔ ＩＩｌｉａＤ０ 驴ｎｉｓｎ１ｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ，２ＯＯ２，１５（２）：１６７． ［３］Ｃｏｓｔｅｒｔｎｏ ＪＷ，Ｓｔｅｗａｘｔ Ｐｓ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ＥＰ，ｅｔ ａ１．Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｉｆｌｍｓ：ａ ｃｏｍ． １１１ｏ１１ ｃｍｌｓｅ ０ｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｉｎｆｃｅｉｔｏｎｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，２８４（５４１８）：１３１８． ［４］Ｄｏｔｌｌｌｆｌｌ ＲＭ．Ｂｉｏｌｉｌｍｓ ａｎｄ ｄｅｖｉｃｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｉｎｆｃｅｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｅｒｒ１ｅＩ芎Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００１，７（２）：２７７． ［５］Ｌｅｉｄ ＪＧ，Ｗｉｌｌｓｎｏ Ｃｊ，Ｓｈｉｒｔｌｉｆ ＭＥ，ｅｔ １ａ．Ｔｈｅ ｅｘｐｏｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｌｇｌｎ￣ｔｅ ｐｒｏｔｅｃｔｓ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ￣ｎｌｇＪｉｌＯＳａ ｂｉｏｆｉｌｍ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍ ＩＦＮ－ｇａｍｍａ－・ｍｅｄｉ－－ ａｔｄｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｋｉｎｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ ｈｎｎｍ￣ｏｌ，２ＯＯ５，１７５（１１）：７５１２． ［６］Ｐｉｅｒ ＧＢ．Ｒａｔｉｏｎａｌｅｆｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ０ｆｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｉｅｓｔｈａｔｔａｒｇｅｔ ｍｕｃｏｉｄ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａ￣ｌＭｇｉｎａｓａ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｐ￣ｔｌｎｏｔｓ［Ｊ］．Ｂｅｈｒｌｎｇ ＩｎｓｔＭｉｔｔ，１９９７，９８：３５０． ［７３ｓ￣Ｋ．Ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｌｃａ ｎａｄ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ０ｆ ｂｉｏｂｉｆｎ ｆｏｘ．ｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｅ －－－——１４０・。－—— Ｃｈｉｎ Ｊ Ｌａｂ Ｄｉａｍ，Ｊａｎｕａｒｙ，２ＯＯ９，Ｖ０ｌ １３，Ｎｏ．１ Ｂｉｏｌ，２００３，４（６）：２１９． ｆｏｒ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ０ｆｂａｃｔｅｉｒａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２０００；１８２（１）：２２５． ［１８］Ｅｒｉｎ Ｊ．ｖａｎ Ｓｅｈａｉｋ，Ｃａｌｌｌｌｅｎ Ｌ，ｅｔ ａ１．ＤＮＡ Ｂｉｎｄｉｎｇ：ａ Ｎｏｖｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍａｎａｓ ａｅｍｇｉｎｏｓａＴｙｐｅＩＶ砌［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ０ｆ Ｂａｃｔｅｒｉｄｏｇｙ，２ＯＯ５， １８７（４）：１４５５． ［８］Ｊｏｎｅｓ ＨＣ，Ｒｏｔｈ ＩＬ，Ｓａｕｎｄｅｒｓ ＷＭ ＩＩＩ．Ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａ ｓｌｉｍｅ ｌａｙｅｒ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ。１９６９，９９（１）：３１６． ［９］Ｗｈｉｔｅｌｅｙ ＭＭ．Ｂａｎｇｅｍ ＲＥ，Ｂｕｒａｇａｍ￣ＭＲ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎ ｉｏｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｂｉｏｌｆｌｍｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４１３（６８５８）：８６０． ［１０］Ｇｒａｃｉａ Ｅ，Ｆｅｍ６ｎｄｅｚＡ，Ｃｏｎｃｈｅｌｌｏ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ａｄｉｆｅｍｎｃｅ ｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｌＩ ｓ ｓｌｉｍｅｐｗｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ｖａｒｉａｎｔｓｔｏ ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ｕｓｅｄｉｎ ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ ［１９］Ｔｒａｖｉｓ Ｓ．ｗａｌ】ｋｅｒ，Ｋｅｒｒｙ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｐｓｅｕｄｏｍａｎａｓ．ｅｍｓｉｎｏ￣ Ｂｉｏｆｉｌｍ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｎｅｎｔｒｏｐｈｉｌｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｎｔｍｍｉｔｙ，２００５，７３（６）：３６９３． ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｏｒｔｈｏｐ，１９９７，２１（１）：４６． ［１１］Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｓ，Ｔｍｍａｎｏｔｏ Ｔ，Ｙｏｎｅｋｕｒａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉ— ｔｙ ｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａＵｌ＇ｅＵ８ ａｎｄ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ｂｉｏｆｉｌｍｓｉｓｏ— ［２ｏ３ｏ’ＴｏｏｌｅＧＡ，ＰｒａｔｔＬＡ，Ｗａｔｎｉｃｋ ＰＩ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅｄｃ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓｔｏ咖ｄｙ ｏｆ ｂｉｏｉｆｌｍｓ［Ａ］．Ｉｎ：Ｄｏｙｌｅ ＲＪ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，３１ｏ［ｃ］．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９９，９１—１０９． ｌａｔｅｄｆｒｏｍｉｎｆｅｃｔｅｄｔｏｔａｌ ｈｉｐ ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ ｃａｓｅｓ［Ｊ］．ＪＯ￣ｈｏＶ Ｓｃｉ，２ＯＯ６，１１ （１）：４６． ［２１］Ｆｏｎｓｅｃａ ＡＰ，Ｓｏｕｓａ ＪＣ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｈｅａｒ￥ｔ１＂ｔ￣８ ｏｎ 矾，Ｉ｝ｌ，ａｄｈｅｓｉｎ ａｏｎｄ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒｍａｔｉｎ ｏｏｆ Ｐｓｎｄｏｍｏａｎｍ删西ｎｏｓａ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ—ｉｎｄｕｃｅｄ ［１２］Ｓｔｅｗａｒｔ ＰＳ．Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｃａｓｍ＂ｅｒｎｅｎｔａ ｅｆｅｃｔｉｖｅ ｄｉｆｕｓｉｖｅ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｉｓｅ ａｎｄ ｅｆｅｃｔｉｖｅ ｄｉｆｕｓｉｎ ｃｏｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓ ｉｎ ｂｉｏｉｆｌｍｓ．［ｊ］． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ，１９９８，５９（３）：２６１． ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｍａｔｉｎａａｌ Ｊａｍｍｌ ｏｆＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ蛳ｔ８， ２ＯＯ７，３０（３）：２３６． ［２２］ ｍ ＡＭ，ｗ列ＳＲ，Ｏｍａｔｏ￣ａｌｄ Ｗ，ｄ ａ１．ＭｉｅｒａｍＴａｙ ａＩｌａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｆｎｃ・ａ ｉｆｏｎａｌ￣ｚａｔｉｎ ０ｏｆ ｔｈｅ ｌ１ｉｈ ｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｎ嘎ⅡＩｌ ｄ ａｎｄ ［１３］Ｘｕ ＫＤ，ＭｃＦｅｔｅｒｓＧＡ，Ｓｔｅｗａｒｔ ＰＳ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｏｆｉｌｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏ ａｎｔｌｍｉｃｍ— ｂｉａｌ ａ ｔｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２ＯＯＯ，１４６（Ｐｔ ３）：５４７． ［１４］Ｍａｔｈｅｅ Ｋ，Ｃｉｆｏｕ０，ＳｅｍｂｅｒｇＣ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｃｏｉｄ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ０ｆＰｓｎｄｏｅｍｏｎａｓ ａｅｍｇｉｎｏｓａ ｂ ｄＩ ｐｅｒｏｘｉｄｅ：ａｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒ￣ｉｍｌｎｅｅ ｅａｃｔｉｖａｔｉｎｉｏｎ ｒａｕｅｏｉｄ Ｐｓｅｕ￣ｍｕ ｎ。ｓａ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｄ，２Ｏ０４，１８６（２）：４ｏ４６． ￣．ｅｓａ［Ｊ］．Ｊｎｍａｏｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ－ ［２３］ＢａｒｒａｕｄＮ，Ｉ－Ｉａｓｓｅｔｔ Ｄ Ｊ，ＨｗａｎｇＳＨ，ｅｔ ａ１．ＩｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅｉｎ ＢｉｄｉｌｍＤｉｓｐｅｒｓａｌ ｏｆ Ｐｓｅｕｄ￣ｇＹ，２Ｏ０６，１８８（２１）：７３４４． ｔｈｅ ｃｙｓｔｉｃ ｉｆｂｒｏｓｉｓ ｌｕｎｇ．［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，１４５（６）：１３４９． ［１５］Ｒａｍｓｅｙ ＭＭ，Ｗｈｉｔｅｌｅｙ Ｍ．Ｐｓｎｅｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕ ｎ０８ａ ａｔｔａｃｈｍａｎｔ ａｎｄ ｂｉｏｉｆｈｎ ｄｅ－／ｄｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｄｙｎａｍｉｃ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２ＯＯ４， ５３（４）：１０７５． ［２４］Ｍａｒｔｉｎ ＤＷ，Ｓｃｈｕｒｒ ｉＪ，Ｍｕｄｄ ＭＨ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｃｏｏｎｖｅｒｓｉｎｏ ｔｏ １１３１１． ｃｏｉｄｙ ｉｎ Ｐｓｎｄｏｅｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｃｙｓｔｉｃ ｉｆｂｒｏｓｉｓ ∞Ｉ８［Ｊ］． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９３，９０（１８）：８３７７． ［１６］Ｌｅｅ ＫＫ，Ｓｈｅｔｈ邶，Ｗｏｎｇ ＷＹ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｍｇ－ ｉｎｏｓａ ｐｉｌｉ ｔｏ ｇｌｙｃｅｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ ｉｓ ａ ｔｉｐ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｖｅｎｔ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｔｈｅ Ｃ・ ［２５］Ｊｅｎｓｅｎ ＰＱ，Ｂｊａｍｓｈｏｌｔ Ｔ，Ｐｈｉｐｐｓ Ｒ，ｄ ａ１．Ｐ￣ｐｉｄ ｎｅｃｒｏｔｉｃ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ｐｏｌｙ— ｍｏｒｐｈｏｎｕｄｅａｒ ｌｎｋｏｃｙｔｅｅｓ ｉｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｑｕｏｎｍ￣ｓｅｎｓｉｎｇ－ｃｏｎｔｍＵｅｄ ｐｍ— ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｇｉｏｎ ｆｔｏｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｉｌｉｎ ｓｕｂｕｎｉｔ［Ｊ］．１９９４，１１（４）：７０５． ［１７］Ｒａｓｈｉｄ ＭＨ，Ｒａｏ ＮＮ，Ｋｏｍｂｅｒｇ Ａ．Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｄｕｃｔｉｏｎ ０ｆ ｒｈａｍｎｏｌｉｐｉｄ ｂｙ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｌｌｌ￣ｒｌｌｇｉｎｏｓａ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ２ＯＯ７，５；１５３（５）：１３２９． （收稿日期：２０ｏ８一Ｏ１—２２） 文章编号：１００７—４２８７（２００９）０１—０１４０—０２ 超敏Ｃ反应蛋白和低密度脂蛋白 对糖尿病肾病患者的临床意义 罗 军，胡晓芳李言 （沈阳市陆军总医院检验科，辽宁沈阳１１００３１） 糖尿病（ＤＭ）是一种常见的内分泌性疾病，而糖尿病肾 病（ＤＮ）是糖尿病的严重微血管并发症，也是引起ＤＭ病人死 亡的主要原因之一【１ Ｊ。已有许多报道证实，在２型糖尿病患 者体内存在炎症反应。超敏ｃ反应蛋白（１ｌｓｃＲＰ）是一种由肝 脏产生的急性时相反应蛋白，已证实与糖尿病并发症的发生 （ＮＡ，ＵＡＥＲ＜３０ ｍ＃Ｚ４ ｈ）７４例，男２０例，女３４例，年龄４４— ６７岁；微量蛋白尿组（ＭＡ，ＵＡＥＲ ３０—３００ｍｓ／Ｚ４ ｈ）５２例，男ｌ６ 例，女２０例，年龄４８—７６岁；临床蛋白尿组（ＣＰ，ＵＡＥＲ￣＞３００ ｍｓ／２４ ｈ）４４例，男２４例，女２０例，年龄５０—７４岁。正常对照 组（Ｎｃ）为本院体检健康者６４例，男４０例，女２４例，年龄４１ —发展有关。本研究对１７０例不同时期ＤＮ患者血清进行 ｈｓＣＲＰ和ＬＤＬ－Ｃ的检测，以探讨其在ＤＮ中的临床意义。 １资料与方法 ６８岁。所有研究对象均排除肿瘤、感染或相关疾病、 ｔｌ，、 所有研究对象均采空腹静脉血，分离血清 肝、肾等疾病患者。 １．２检测方法后一２０ｑＣ冰箱保存。ｈｓＣＲＰ测定采用免疫射比浊法，ＬＤＬ－Ｃ 的测定为一步法，仪器为日立７１７０Ａ全自动生化分析仪，试 １．１一般资料 １７０例ＤＮ患者均为本院内分泌科住院病 人，糖尿病诊断符合１９９９年ＷＨＯ的诊断标准。根据２４小时 尿白蛋白排泄率（ＵＡＥＲ）将病人分为三组：正常蛋白尿组 剂由维日康生物科技有限公司提供。
